Inhoudsopgave
Waarom gebeurt de restrictie op 37 C?
De buisjes worden vervolgens in een waterbad bij 37°C geplaatst. De restrictie-enzymen werken optimaal bij deze temperatuur. Het λ-DNA wordt nu door de restrictie-enzymen “geknipt”, zodat meerdere DNA-fragmenten met verschillende lengte bekomen worden.
Hoe weet een restrictie-enzym waar het moet knippen?
Elke restrictie-enzym herkent een specifiek stukje (sequentie) DNA. Er worden de volgende drie typen onderscheiden: Type I knipt het DNA op een willekeurige plaats ver van de herkenningsplaats. Type II knipt het DNA binnen de herkenningsplaats.
Wat zijn restrictie-enzymen en hoe werken ze?
Een restrictie-enzym is een enzym dat een specifieke DNA-volgorde herkent en op die plek de DNA-strengen doorknipt. Elk restrictie-enzym heeft een eigen specifieke nucleotidenvolgorde, meestal 4 tot 8 nucleotiden lang, die herkend wordt.
Wat is dubbel restrictie?
Restrictie-enzymen knippen een dubbelstrengs DNA-streng op een specifieke plaats. Ze komen uit bacteriën, en heten daarnaar: zo komt EcoR I uit E(scherichia) coli. Sommige restrictie-enzymen geven rechte uiteinden (‘blunt ends’). Andere geven ongelijke einden (‘sticky ends’) die ook weer makkelijk aan elkaar binden.
Wat is restrictie analyse?
De restrictie-enzymen die een bacterie gebruikt om zich tegen virussen te beschermen, zijn nuttig gereedschap gebleken bij het achterhalen van de identiteit van een misdadiger. De eerste stap in deze ‘oervorm’ van DNA analyse is het toevoegen van een bacterieel restrictie-enzym.
Wat is een restrictie?
v. beperking, Inkrimping; beperkende bepaling; voorbehoud.
Hoe Gelelektroforese aflezen?
Deze verzameling van moleculen kan vervolgens zichtbaar worden gemaakt met een kleurstof, waarbij een patroon van streepjes verschijnt. DNA wordt vaak zichtbaar gemaakt met een kleurstof die oplicht onder uv-licht. Ook kunnen fluorescerende labels worden gebruikt om DNA-fragmenten te identificeren.
Waarom Renatureren plasmiden sneller dan chromosomaal DNA?
Aangezien de twee strengen van de circulair gesloten plasmiden in elkaar gehaakt zijn, kunnen ze niet uit elkaar. Wanneer het basisch milieu in de derde stap geneutraliseerd wordt door toevoeging van zuur, zullen de plasmiden sneller renatureren dan het chromosomaal DNA.
Waarom is DNA negatief geladen?
DNA is negatief geladen door de aanwezigheid van fosfaatgroepen in de DNA-keten. Er wordt een constante stroom gestuurd doorheen de gel. Aan beide kanten van de gel bevinden zich de elektroden (verbonden met de stroombron), die hiervoor verantwoordelijk zijn.
Welk verband is er tussen migratie afstand en Molmassa van het DNA?
Hoe groter de moleculen, des te trager ze zullen bewegen (migreren); hoe kleiner de moleculen, hoe sneller ze zullen bewegen. De te scheiden moleculen kunnen bijvoorbeeld eiwitten of DNA-fragmenten zijn.
Waarom knippen restrictie enzymen niet in eigen DNA?
Zonder goede voorzorgen kan dat natuurlijk niet, want het eigen bacterie-DNA moet intact blijven. Het enzym knipt daarom alleen op heel speciale en goed herkenbare plaatsen, en in het eigen bacterie DNA zit op precies die plaatsen een beschermende mantel die het knip-enzym tegenhoudt.
Hoe kunnen met behulp van restrictie enzymen mutaties aangetoond worden?
Als een mutatie gepaard gaat met het verlies of de vorming van een herkenningsplaats van een restrictie-enzym, dan kan deze verandering gemakkelijk herkend worden door de toepassing van het betreffende enzym. Na de Southern-hybridisatie zal de mutatie leiden tot een band meer of minder dan in de uitgangssituatie.